Avaliação de mutações genéticas em bovinos por PCR-RFLP

Edição: XIV - 2021

ID: 1402

Participantes:

• [BOLSISTA] - Brenda Ariel da Silva Dorneles | brendaariel.dorneless@gmail.com
• [ORIENTADOR] - Pedro Augusto Silva Silveira | pedrosilveira3@hotmail.com
• [VOLUNTARIO] - Augusto Schneider | augustoschneider@gmail.com
• [VOLUNTARIO] - Maria Seloi Pereira | pereiramariaseloi@gmail.com

Número de Registro: PE06200620/055

Campus: Visconde da Graça

Nível: Ensino Superior

Área: Ciências Agrárias

Temática: Multidisciplinar

Resumo

A utilização de bovinos com maior mérito genético para produção de carne e leite tem sido alavancada pelos estudos sobre o tema e o desenvolvimento de novas tecnologias. Neste contexto, buscamos entender a ocorrência de mutações de nucleotídeo único (SNP, single nucleotide polymorphism) no DNA e sua relação com parâmetros produtivos de interesse, através da genotipagem por PCR-RFLP. O objetivo do trabalho é apresentar esta técnica e discutir algumas vantagens e limitações. Utilizamos amostras de sangue total de 210 vacas para extração do DNA e genotipagem de um SNP previamente observado no gene de uma proteína ligada a inflamação (Paraoxonase 1). Para a reação em cadeia da polimerase (PCR, polimerase chain reaction) uma alíquota de DNA de cada amostra foi diluída em água ultrapura, contendo também dois primers iniciadores específicos, nucleotídeos do DNA (adenina, citosina, guanina e timina), tampão, cloreto de magnésio (MgCl2) e polimerase. A reação passou por 40 ciclos com três fases: desnaturação da fita de DNA (94 0C, 60 seg), alinhamento dos primers (57 0C, 45 seg) e alongamento da nova fita molde (72 0C, 60 seg). Para a digestão enzimática (RFLP, restriction fragment length polymorphism), uma alíquota da reação de PCR foi diluída em água ultrapura, juntamente com tampão e a enzima BslI, com afinidade específica para o SNP estudado (A/G). Após, foi feita eletroforese em gel de agarose para identificação dos genótipos. Como vantagens observamos o baixo custo em relação a outras técnicas, com repetibilidade de resultados e grande sensibilidade e especificidade. A análise de uma mutação por vez e o tempo entre a coleta da amostra e o resultado são os maiores limitantes para a utilização em larga escala. Sendo assim, a técnica de PCR-RFLP tem se mostrado uma excelente alternativa para estudos em bovinos, visando identificar potenciais marcadores genéticos para o melhoramento animal.

Palavras-chave

GENOTIPAGEM;MARCADORES GENÉTICOS ;SNP

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